Определение концентрации белка по Брэдфорд

Определение концентрации белка методом Брэдфорд – один из наиболее популярных методов, используемый для определения концентрации белка в растворе. Метод определения концентрации белка по Брэдфорд успешно используется в случае измерения растворов с низкой концентрацией белка и растворов, содержащих компоненты, также обладающие значительным поглощением при 280 нм. Метод определения концентрации белка по Брэдфорд, так же, как и метод Лоури и BSA, требует построения стандартной калибровочной кривой перед измерением концентрации неизвестного белка.

Измерение концентрации белка методом Брэдфорд активно применяется в лабораторной и исследовательской практике, а так же в клинических анализах и медицинской диагностике. Универсальность метода и его гибкость позволяют создавать модификации процедуры измерений для различных целей и типов измерений.

Метод Брэдфорд основан на сдвиге спектра поглощения кумасси (Coomassie Blue) в сторону значений 595 нм прямо пропорционально концентрации содержащегося в растворе белка. Кумасси образует комплекс с белком; этот комплекс измеряют при длине волны 595 нм. абсорбционная фотометрия комплекса кумасси / белок имеет очень высокую чувствительность и эффективна даже в случае следовых концентраций белков.

При постановке реакции Брэдфорд используют соотношение объема реагента к образцу равное 50:1 (минимально рекомендуемый объем соответствует 200 мкл реагента и 4 мкл образца – в данном случае измерение поглощения при 595 нм проводят в кювете с длиной оптического пути 1 мм).